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预杂交

预杂交是将固定于载体膜上的DNA片段与DNA探针进行杂交之前的试验处理过程,是Southern印迹杂交中的一个重要的步骤。DNA探针在与结合于载体膜上的DNA片段杂交的同时同样能够结合于载体膜上,即消耗了DNA探针,也严重地降低了背景的反差。因此,在进行杂交前,必须将载体膜上所有能与DNA结合的部位全部封闭,这一过程称为预杂交。 [1]

预杂交的基本方法是将转印后的载体膜置于预杂交液中,预杂交液不含探针,主要成分为商品化的鲑鱼精子DNA、酪蛋白或牛血清等,这些大分子可非特异性与载体膜空白部位结合即封闭载体膜再次与DNA的结合能力,以保证杂交的特异性。


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